流式細胞術,顧名思義,是研究細胞的一種技術,但是它的研究對象不僅僅局限于真核細胞,還可以研究細菌、病毒以及各種蛋白等等。無論你是基礎科研工作者還是臨床醫(yī)生,都用得上這項技術。與之相關的儀器----
流式細胞儀。
通過流式細胞儀可分析各時期的細胞百分數(shù),來檢測細胞的增殖、凋亡。
流式細胞儀分析原理:通常用PI染細胞核,PI在一定波長的光下發(fā)出熒光,其強度與DNA含量成正比。綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及其它發(fā)光基團也可作為標記物,分選細胞。
流式細胞儀測量方法:
1)將細胞以1×106接種于60mm培養(yǎng)板,80%匯合后轉染。
2)24小時后在新鮮培養(yǎng)液中加入適當?shù)目股兀ㄕ婧吮磉_載體上的抗性標記)進行培養(yǎng)(該步可選)。
3)48-72小時后用胰酶消化收集細胞,PBS洗兩遍,棄上清,加入1ml 70%預冷乙醇中,吹打均勻,4℃固定12小時以上。
4)PBS洗滌去乙醇,1000rpm,5min,洗兩遍。
5)0.5mlPBS重懸細胞,加入PI和RNaseA至終濃度50µg/ml,37℃溫浴30 min。
6)用流式細胞儀測定周期。
PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
RNaseA:10mg/ml。